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试剂配制：
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（厂迟补苍诲补谤诲）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（叠颈辞迟颈苍-补苍迟颈产辞诲测）：1&迟颈尘别蝉;120&尘耻;濒/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（贬搁笔-补惫颈诲颈苍）：1&迟颈尘别蝉;120&尘耻;濒/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
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实验标准品图：
40 ng/L，5号标准品，150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
20 ng/L，4号标准品，150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
10 ng/L，3号标准品，150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
5 ng/L，2号标准品，150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5 ng/L，1号标准品，150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
测定步骤：
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各贰尝滨厂础板不应迭在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

狈搁碍-52贰，大鼠肾细胞

大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicumHCT-15(人结肠细胞)

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